Анализ кала на энтеровирус

Анализ на энтеровирусную инфекцию: виды диагностики

Анализ на энтеровирусную инфекцию является одним из распространенных лабораторных методов в силу частого заражения этим возбудителем. Для уточнения диагноза используются различные способы диагностики.

Основные методы диагностики

Чтобы подтвердить диагноз энтеровирусной инфекции, применяют методы лабораторной диагностики: специфические вирусологические методики.

Инфекцию может вызвать содержащий рнк энтеровирус или семейство аденовирусов, которые поражают как слизистую оболочку кишечника, так и ткани верхних дыхательных путей, глаз. По этой причине материалом для исследования является не только кал, но и смывы с носоглотки и конъюнктивы.

Если подозревается энтеровирусная инфекция, диагностика проводится в первые дни от начала заболевания, когда концентрация вирусов является наибольшей.

Чтобы дифференцировать инфекцию применяются такие серологические методы:

определение иммуноглобулинов к вирусу;
выделение аденовирусов в кале;
ПЦР-диагностика;
иммунофлуоресцентный метод.

Особенностью при инфицировании аденовирусной инфекцией является длительное выделение возбудителя и вирусоносительство после исчезновения симптомов болезни. По этой причине через 2-3 недели после заболевания обследование необходимо повторить, что важно для профилактики повторного заражения в коллективе. Инфицированию больше подвержены дети в возрасте до 14 лет.

Выявление антител

Определение антител (иммуноглобулинов) к аденовирусам проводится методом иммуноферментного анализа (ИФА).

Такая диагностика основана на способности организма вырабатывать защитные белки (антитела, иммуноглобулины) в ответ на заражение.

С помощью специально подобранных реактивов можно определить наличие антител к определенному типу возбудителя. Кроме диагностики аденовирусной инфекции в целом, можно определить серотип возбудителя.

Для сдачи анализа в стерильную емкость набирается венозная кровь. Забор материала необходимо проводить натощак, а интервал после приема пищи должен быть не меньше 8 часов. За 24 часа до исследования нельзя принимать алкоголь. Для профилактики искажений результата не стоит проводить анализ после физиотерапевтических процедур, флюорографии и других рентгенологических исследований.

Позитивный результат подтверждается наличием иммуноглобулинов класса IgG. Эти антитела образуются в крови человека разу после заражения, а в периоде острой фазы болезни концентрация их резко повышается.

Метод парных сывороток – это диагностический способ определить острую фазу энтеровирусной инфекции в течение первых 2-х недель от заражения. Для этого исследуется динамика нарастания концентрации антител с интервалом от 10 дней до 2 недель. В случае значительного роста подтверждается наличие свежей инфекции. Чувствительность такого метода составляет 90%.

Кроме того, рост IgG отмечается при реактивации латентной инфекции. По мере выздоровления концентрация антител в крови падает, но они циркулируют еще продолжительно время, указывая на перенесенную инфекцию.

Стойкого иммунитета к энтеровирусной инфекции нет, а при повторном заражении отмечается повторный стремительный рост специфических IgG.

Анализ кала

Энтеровирусы и аденовирусы вызывают кишечные формы заболевания или по мере развития инфекции она распространяется на слизистую оболочку кишечника, вызывая характерные симптомы.

Из-за недостаточного выполнения норм личной гигиены инфекцией чаще заражаются маленькие дети, у которых распространенным путем передачи является фекально-оральный.

К высокой температуре, явлениям катара верхних дыхательных путей и конъюнктивита присоединяется учащенное испражнение. Больного беспокоит диарея, водянистый светлый кал, боли в животе.

Такие симптомы являются показанием для лабораторной диагностики энтеровируса. Исследование необходимо проводить не позже 3 – 5 дня после появления симптомов. Через неделю болезни концентрация энтеровируса в кале уменьшается, что может снижать качество диагностики.

Тем не менее после выздоровления переболевший является источником инфекции, так как отмечается вирусоносительство, а возбудитель продолжает выделяться с калом.

Анализ также проводится для выделения конкретного возбудителя – для человека патогенными считаются несколько серотипов вируса.

Перед сдачей анализа необходимо помочиться, чтобы исключить попадание мочи в исследуемый материал. Для диагностики необходим свежий стул не более 15 г. Его набирают в специальный контейнер. Анализ должен пройти лабораторную диагностику не позже чем через 3 часа после забора материала.

Перед сбором кала нельзя применять любые препараты, влияющие на работу кишечника (слабительные или закрепляющие), а также делать клизмы. Прием дополнительных препаратов накануне забора материала, примеси мочи или других биологических жидкостей могут повлиять на конечный результат, сделав его недостоверным.

Результатом диагностики является положительный или отрицательный ответ. В первом случае врач может подтвердить диагноз и приступить к целенаправленному лечению болезни. В случае негативного результата, но при продолжающихся симптомах необходимо повторное проведение исследования.

Метод ПЦР

Диагностика энтеровирусной инфекции современной методикой цепной полимеразной реакции является одним из наиболее достоверных и быстрых способов.

Этот тест основан на обнаружении вирусной ДНК в крови человека или мазке из зева. С его помощью возможна как диагностика острых форм болезни, так и определение вирусоносительства.

Анализ на энтеровирус методом ПЦР является “золотым стандартом” вирусологической диагностики. Этим способом проводится дифференциальная диагностика энтеровирусной инфекции.

Больной не нуждается в специальной подготовке, однако перед забором материала необходимо следовать некоторым правилам:

исследование рекомендовано проводить натощак и с интервалом не менее 8 часов после еды;
желательно не принимать какие-либо препараты за сутки до сдачи крови;
отказ от приема алкоголя за день до исследования и курения не менее чем за час до забора крови;
отказ от физических и психических перенапряжений накануне диагностики;

Нежелательно осуществлять забор крови после физиотерапевтического лечения или инструментальных исследований. В случае проведения биопсии следует сделать паузу на несколько дней.

Если доктор назначил проведение повторного лабораторного исследования, желательно делать это в одинаковых условиях: в той же лаборатории, в одно и то же время.

Иммунофлуоресцентный метод

Метод иммунофлюоресценции основан на реакции со специальными реагентами, которые помечены красителем. Он применяется в рамках ранней диагностики энтеровирусной инфекции. Для исследования проводят соскоб со слизистой носа.

При определении энтеровирусов в организме человека во время микроскопии мазок подсвечивают ультрафиолетовыми лучами. Этот метод является способом экспресс-диагностики инфекции.

Специальные реактивы содержат антитела против энтеровирусов. При связывании антигенов и антител образовавшиеся комплексы становятся хорошо видимыми в ультрафиолетовом свете.

Такой тест имеет три разновидности:

прямой;
непрямой;
конкурентный.

Для проведения прямого способа диагностики к материалу анализа добавляют люминесцентный реактив. Образовавшиеся комплексы рассматривают через флуоресцентный микроскоп. При том анализе определяют наличие вирусных антигенов.

Тест при непрямой реакции определяет наличие антител в собранном материале. Реагентом выступает специальный антиген, который взаимодействует с антителами, выработанными в организме человека.

При конкурентном способе исследуют наличие вирусных антигенов. Отличие способа состоит в добавлении двух реагентов: антител и специальных меченых антигенов, которые конкурируют в реакции связывания.

Заключение

Точное диагностирование энтеровирусной инфекции необходимо для дифференциального диагноза и правильного назначения терапии. Современные методы позволяют сделать это быстро и качественно.

Источник: https://nashainfekciya.ru/virus/entero/analiz-na-enterovirusnuyu-infekciyu.html

Исследование на энтеровирусную инфекцию

Энтеровирусы — род одноцепочечных РНК-вирусов, включающий 15 видов (по ревизии 2019 года), более 100 серотипов.

Ранее в род входил 71 вид, в том числе вирусы полиомиелита, вирусы Коксаки и другие патогенные для человека серотипы.

Энтеровирусы имеют повсеместное распространение, они резистентны к кислой среде и бытовым дезинфицирующим средствам, способны сохраняться при комнатной температуре несколько суток.

Все вирусы рода Enterovirus имеют сходный механизм развития заболевания и его проявлений. Возбудитель попадает в ЖКТ фекально-оральным путём, реплицируется в эпителии слизистой ЖКТ и через кровь распространяется по организму, поражая разные ткани, органы и целые системы. В связи с особенностями инвазии для исследований на инфицированность берут ликвор, кал, отделяемое носоглотки.

Острая фаза инфекции обычно проходит без симптомов, а развитие клинической картины требует некоторого времени после первичной инвазии. Такая особенность заболевания должна учитываться при выборе биоматериала, который направляют на исследование.

Определение энтеровирусов с помощью ПЦР — преимущества и сложности

Подозревая энтеровирус-ассоциированную инфекцию, проводят серологические анализы, молекулярную диагностику, выделяют вирус в культуре клеток.

Молекулярная диагностика (ПЦР) выявляет в биоматериале фрагменты РНК энтеровируса. Молекулярный анализ обладает высокими специфичностью и чувствительностью, даёт точный результат быстрее, чем другие исследования, потому для врачей и пациентов он незаменимый инструмент в скорой и точной диагностике энтеровирус-ассоциированной инфекции любого вида.

ПЦР — золотой стандарт для диагностики менингоэнцефалита, вызванного Enterovirus-ассоциированной инфекцией. Для исследования в этом случае берут ликвор (цереброспинальную, спинномозговую жидкость), в результате получают до 97 % чувствительности (способности обнаружить фрагменты вируса в биоматериале) и до 100 % специфичности (способности определить вид вируса).

Столь высокие показатели, максимально приближенные к идеалу, позволили заменить молекулярной диагностикой ещё один прямой способ определения возбудителя — выявление энтеровируса в клетках эмбриона.

Однако тестирование ликвора, который взяли в первые двое суток появления симптомов менингоэнцефалита, менее чувствительно.

Также меньшей чувствительностью обладает исследование каловых масс, отделяемого носоглотки, мазка, отделяемого язв, то есть нестерильного биологического материала.

Эту особенность нужно учитывать, если результат теста отрицательный, при этом пациент имеет признаки энтеровирусной инфекции.

Для множество ложноотрицательных результатов причиной становится полная элиминация энтеровируса (исчезновение) из клеток желудочно-кишечного тракта к тому моменту, когда проявились симптомы болезни: в глоточном эпителии вирус реплицируется до 14 дней, в ЖКТ — до 90 дней.

Ложноположительные результаты исследования нестерильных типов биоматериала возникают в связи с тем, что бессимптомное носительство энтеровируса чрезвычайно распространено в популяции людей.

ПЦ-реакция выявляет собственно РНК энтеровируса, потому отлично работает даже на ранних этапах заболевания. В то время как серологические тесты требуют от 14 до 32 дней для отслеживания уровня специфических антител и постановки диагноза. Но скорость ПЦР-диагностики имеет и свой недостаток — с её помощью не удаётся различить стадии острой и хронической энтеровирусной инфекции.

Так как с помощью ПРЦ определяют общий для видов энтеровирусов фрагмент РНК, реакция устанавливает присутствие любых представителей рода. А возможности современных серологических методов ограничены только 11 видами.

Недостатком такой чувствительности в некоторых случаях становится невозможность различить виды энтеровирусов между собой: это важно при дифференциации Сoxsackievirus type A 16 (ассоциированное поражение нервной системы) и EV71. Потому диагностика болезней, причиной которых стали энтеровирусы, требует дополнительного тестирования и инструментального исследования.

EV71 — один из самых патогенных в роду энтеровирусов человека, способен вызывать летальный исход. Особенно опасен он для детей в возрасте до 10 лет, а самые сложно корректируемые последствия заболевания появляются у детей до 2 лет.

Цели тестирования

ПЦР используют, чтобы выявить заболевания, ассоциированные с инвазией энтеровирусами:

менингит — воспаление мягких, паутинных и твёрдых мозговых оболочек;
миоперикардит — воспаление миокарда в результате сердечной инфекции;
герпетическую ангину (герпангину, энтеровирусный везикулярный фарингит);
полиомиелит;
вирусную пузырчатку конечностей и полости рта.

При каких симптомах назначают исследование:

при менингите, проявляющемся в головной боли, лихорадке, раздражительности, тошноте и рвоте, которая не приносит облегчения, в ригидности (напряжении) затылочных мышц;
при герпетической ангине, проявляющейся в остром старте болезни, лихорадке на фоне высокой температуры 39-40 ºС, в тошноте, рвоте, головных болях, болезненной шейной лимфаденопатии (увеличение лимфоузлов), везикулёзной сыпи на слизистой твёрдого и мягкого нёба, миндалин, боли при глотании;
при вирусной пузырчатке полости рта, конечностей, проявляющейся в лихорадке, кашле разной интенсивности, везикулёзной сыпи на кожных покровах стоп и кистей, на слизистой ротовой полости;
при миоперикардите, проявляющемся в загрудинной боли, которая ослабевает во время наклона вперёд и усиливается на вдохе, в одышке, периферических отёках, в нарушении сердечного ритма;
при полиомиелите, проявляющемся в лихорадке, тошноте, головной боли, абдоминальных болях, в парезе и даже параличе конечностей, мышц, нарушении глотания, пронации — естественного способа постановки стопы при движении.

Источник: https://cdmed.ru/catalog/6650/

Анализ на энтеровирусную инфекцию: виды диагностики — Все микробы

В настоящее время насчитывается более ста серотипов энтеровирусов. Эта инфекция распространена по всему миру. Она может протекать как бессимптомно, так и с множеством клинических проявлений: от небольшого недомогания с диареей вплоть до развития серьезных заболеваний (серозный менингит, миокардит, паралич).

Энтеровирусы – очень распространены, заразиться может каждый

Для диагностирования энтеровирусной инфекции врач проводит комплексную оценку проявляющихся симптомов патологии, а также проводит сбор эпидемиологических данных. Поскольку заражение данным возбудителем выявляется довольно часто, то и анализ на энтеровирус – один из наиболее используемых лабораторных методов.

Назначение анализа

Для подтверждения того, что у пациента имеется энтеровирусная инфекция, используются различные методы диагностики. Они являются довольно специфическими вирусологическими методиками.

Поражение вызывает энтеровирус, который содержит РНК. В организм он попадает через желудок, где и размножается, а затем через кровь разносится по организму.

Вирус проникает в клетки эпителия, а затем в мышцы и довольно часто поражает нервную систему. Поэтому для исследований берутся каловые массы, смывы из органов зрения и мазок из зева на энтеровирус.

Для подтверждения того, что у пациента имеется инфекция, зачастую необходимо использовать различные методики.

При подозрении на наличие энтеровируса в организме необходимо пройти диагностику как можно быстрее.

Именно на начальном этапе развития патологии концентрация вирусов наибольшая. Энтеровирусы обнаруживаются в фекалиях на протяжении 14 дней после инфицирования, в носоглотке – не более семи. После перенесенного заболевания вирусы остаются в организме у человека до 15 месяцев.

При подозрении на энтеровирус, очень важно выполнить анализы

При выполнении анализов на энтеровирусную инфекцию используются различные способы исследования, каждый из которых ориентирован на достижение одной цели:

Направленность серологических методов – на выявление антител к инфекции, вырабатываемых организмом в ответ на инфицирование. Ранними маркерами являются IgА , IgМ.
Вирусологические методики направлены на то, чтобы выделить из взятого материала энтеровирус при помощи выращивания образцов на чувствительных культурах. К иммуногистохимическим способам относятся такие доступные исследования, как иммунопероксидазный и иммунофлюоресцентный анализы.
При выполнении молекулярно-биологических исследований определяется генетический материал непосредственно самого энтеровируса.

Когда применяется

Пик заболеваемости из-за энтеровирусов начинается летом. Путь передачи инфекции – фекально-оральный. Размножаться вирус начинает в желудке и из его оболочек попадает в кровь. Происходит поражение внутренних органов. Энтеровирус может быть обнаружен в секретах человека, фекалиях, а в некоторых случаях в спинномозговой жидкости или крови.

Вирус можно обнаружить в мазке из зева

Для того чтобы подтвердить такой диагноз, как энтеровирусная инфекция, необходимо выделить вирус в культуре самих клеток.

Несмотря на то, что в образцах из зева, отделяемого носоглотки или из кала вирус выделяется во многих случаях, это не является доказательством особой важности этого исследования.

Возможно наличие в организме сопутствующей инфекции, протекающей бессимптомно. В этом случае выделение вируса в организме может происходить неделями.

Анализ кала на энтеровирус довольно часто указывает на наличие заболевания.

При этом в исследуемом материале выявление причинного фактора возможно выполнить на довольно длительном временном отрезке развития патологии.

В то же время анализ из зева на энтеровирус более ценен в качестве подтверждения диагноза, поскольку вирус здесь содержится не так длительно в случае бессимптомного развития болезни.

В других взятых образцах на исследование (кровь, спинномозговая или другие жидкости и ткани) вирус выделяют значительно реже. Иногда инфекционный агент получается выделить лишь из крови. Это подтверждает важность взятия различных проб.

Виды исследований

Для выявления инфекции чаще всего используется методика определения РНК энтеровируса в кале.

Такое исследование требуется проводить не позже чем через пять дней после проявления первых симптомов заболевания (понос, светлый кал, боли в области живота, повышение температуры, конъюнктивит, проблемы дыхания). Следует помнить, что в кале через неделю от начала болезни концентрация вируса существенно снижается.

Также следует сдать анализ крови

Одним из первичных анализов, назначаемых врачом при подозрении на энтеровирус, является сдача крови. Общий анализ на начальной стадии заболевания показывает повышение уровня лейкоцитов и нейтрофилов. Лимфоциты при энтеровирусе, как и эозинофилы, повышаются по мере развития патологии.

Анализ на антитела

Иммуноглобулины, являясь белковыми молекулами, выполняют особые функции. В некоторых случаях они находятся в свободном состоянии в крови, но иногда целенаправленно прикрепляются к поверхности определенных клеток. Это происходит при распознании чужеродных тел. Их прикрепление и служит сигналом для иммунной системы для нейтрализации «нарушителей».

Для выявления иммуноглобулинов, которые называют по-другому антителами к энтеровирусу, проводится специальное исследование ИФА – иммуноферментный анализ.

Он основывается на способности самого организма вырабатывать защитные тела, направленные против инфекции. Для его проведения требуются специальные реактивы.

Кроме того, что ИФА позволяет диагностировать в целом инфекцию, с его помощью определяется и конкретный серотип возбудителя. Сроки изготовления анализа – 3–4 рабочих дня.

Узнать об особенностях этой инфекции и ее лечении можно из этого ролика:

Исследование кала

Для исследования на энтеровирус кал необходимо собирать в пластиковую или стеклянную посуду. Контейнеры обычно выдаются в регистратурах медицинских учреждений. Следует брать среднюю фекальную массу, объем которой должен быть равен половине или одной чайной ложке.

Нельзя собирать кал после проведения клизмы или введения ректальных свечек. Не следует принимать медикаменты перед забором фекалий.

Каловые массы не должны содержать мочу. В связи с этим от нее надо «избавиться» предварительно. Нельзя собирать материал из памперсов. Доставка фекалий должна быть в день их забора. РНК вируса в каловых массах может оставаться в течение месяца и даже более после начала инфицирования.

Обязательно проводится анализ кала

В результате диагностики специалисты могут выдать как положительный, так и отрицательный ответ. При втором результате и наличии симптоматики, указывающей на патологию, необходимо повторить исследование. Положительный результат подтверждает диагноз и позволяет врачу начать целенаправленную терапию.

ПЦР

Одним из самых достоверных методов диагностирования энтеровирусной инфекции является ПЦР (в расшифровке – полимеразная цепная реакция). Этот способ позволяет обнаружить ДНК вирусов в мазке из ротовой полости (зева) или крови пациента. Тест помогает определить вирусоносителя и диагностировать заболевание в острой форме.

Специальная подготовка к ПЦР не требуется, однако некоторых правил все же надо придерживаться:

Исследование следует проводить на голодный желудок. Последний прием пищи должен быть не позднее чем за 8 часов до ПЦР.
Не рекомендуется принимать какие-либо медикаменты до проведения анализа крови на энтеровирус.

Очень важно перед исследованием ничего не есть

Необходимо отказаться от употребления спиртосодержащих напитков как минимум в течение суток до исследования. Не следует курить хотя бы час до забора материала.
Требуется отказаться от тяжелых физических нагрузок и нервных переживаний перед диагностикой.

Не рекомендуется проводить ПЦР сразу после физиотерапии, а также инструментальных исследований. Если накануне пациенту проводилась биопсия, то необходимо сделать перерыв на два – три дня.

ИФА

Для определения антител к аденовирусам проводят специальный метод диагностики – иммуноферментный анализ. Для проведения исследования необходима венозная кровь пациента. Анализ сдается натощак, при этом предыдущий прием пищи не должен быть раньше чем за 8 часов до процедуры.

Алкоголь исключается за сутки до проведения ИФА. Исследование не следует проводить после физиопроцедур или флюорографии. В противном случае результат может оказаться искаженным. Диагноз считается подтвержденным, если выявлены антитела класса IgG.

Именно эти иммуноглобулины усиленно появляются в организме больного в острой фазе патологии.

Для проведения анализа ИФА берут кровь из вены

Используется в диагностике и дополнительная методика, получившая название парных сывороток. Этим способом выявляется острая фаза развития инфекции в первые 14 дней. При исследовании выясняется, как растет концентрация иммуноглобулинов от десятого до четырнадцатого дня. Значительное повышение показателя свидетельствует о свежей инфекции.

Выявляется IgG и в случае реактивации (восстановлении жизнеспособности) скрытой инфекции. При выздоровлении количество антител в организме снижается, но они могут остаться на всю жизнь.

Источник: